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四、粘附剂

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在免疫细胞化学工作中,由于标本(如切片)的脱落常影响工作的质量的速度,故粘附剂的选择和使用就显得较为重要。

1.铬矾明胶

试剂:铬矾0.5g

明胶(Gelatine) 5g

H2O ~1000ml

方法:在1000ml的烧杯或烧瓶中,以500~800ml H2O加温溶解明胶,待其完全溶解后,再加入铬矾。注意温度过高易使明胶烧糊,包被玻片时最好控制水温在70℃。如有明显残渣,过滤后使用。

2.

试剂:40%甲醛2.5ml

明胶0.5g

蒸馏水 至100ml

配制方法:用少许蒸馏水(约80ml)加热溶解明胶,待完全溶化后,加入甲醛,最后补充蒸馏水至100ml混匀即可。

3.多聚赖氨酸(Poly-L-Lycine,PLL)

试剂:多聚赖氧酸  5g

蒸馏水 ~1000ml

配制方法:称取PLL,溶于H2O,充分混合即可,此液浓度为0.5%,可适当稀释配成0.01~0.5%浓度。4℃保存,也可-20℃备用。PLL可反复冰冻,效果无明显影响,工作液常再稀释10~50倍。

4.Vectabond试剂该试剂是Vector公司新进推出的一种新型玻片粘附剂。该试剂与一般的粘附剂不同,它是通过对玻璃表面起化学修饰作用,改变其表面的化学物理特性,使组织切片牢固地贴于玻璃片上,贴上后不易脱落,保留时间较久。一个试剂盒(7ml)可配成350ml工作液(用丙酮配)。处理载玻片前(事先酸处理),用染色缸装好各种液体,按下列程序进行:

干净载玻片→丙酮5min→Vectabond试剂工作液(7ml Vectabond+ 350ml丙酮):将载玻片用镊子夹住浸入Vectabond试剂1~2次→dH2O,2×5min→干燥(37℃过夜)→用铝箔包好,室温存放备用。

注意:避免污染(尘埃等)。

综上述方法处理的载片一般可存放半年以上。

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