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五、抗着丝点抗体的检测方法

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1.HEP-2细胞涂片的制备HEP-2细胞系人喉癌上皮细胞,在完全Eagle培养液中,37℃,二氧化碳孵育48~72h,使细胞生长达到一定数量,约1.2~1.5×106/ml,经胰酶消化后,可以传代或分装到置有玻片的培养皿中,继续用Eagle液培养及上述条件孵育,48h细胞不仅贴附于玻片上并已长成单细胞层。取出玻片用丙酮固定15min,自然干燥后待用,或保存于-20℃或4℃中。

表15-3 各种抗核抗体及临床意义

注:Sm(Smith);RNP:核糖核蛋白;Sn:为小核;SSB:干燥综合征B;SS-A:干燥综合征-A,Scl-70:硬皮病70,抗原分子量70000;PCNA:增殖细胞抗原;PM-1:多发性肌炎-;RANA:类风湿性关节 核抗原;dsDNA:双链DNA;ssDNA:单链DNA。

2.染色方法用间接免疫荧光法。

3.结果着丝点抗原是紧附于染色体着丝点的DNA蛋白质,当与相应抗体结合后荧光图型为约46个圆的荧光亮点。国际上多用HEP-2细胞,因这种细胞核大,分裂相旺盛,着丝点容易显露,这种抗体在进行性系统性硬化症(PSS)中阳性率可达31%~98%,是PSS的CREST型的标记抗体,CRESF是指具有软组织钙化,雷诺现象,食管功能低下,指端硬化,毛细血管扩张的PSS患者。

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