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二、血清或肾脏洗脱液的检查

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肾脏疾病时,血清学检查亦甚为重要,现仅就与免疫细胞化学有关者介绍如下:

1.血清或肾脏洗脱液内抗肾小球基底膜抗体的测定在快速进行性肾小球肾炎(RPGN)及Goodpasture综合征病人血清中常存在有抗肾小球基底膜抗体,对病人血清进行检查有重要的诊断意义。动物实验中,对马杉氏肾炎等实验性肾小球肾炎动物,进行肾脏洗脱液的检查,以确定有无抗肾小球基底膜抗体的存在。一般常用免疫细胞化学技术进行检查,先将病人血清与灵长类(如猴等)的肾组织冰冻切片在37℃湿盒内孵育半小时,再将切片用FITC荧光素或HRP标记的抗人Igg 抗体处理。如果病人血清中存在有抗肾小球基底膜抗体,即可与切片上的肾小球基底膜相结合,进一步与荧光标记抗人IgG抗体相反应,而显示沿肾小球毛细血管壁呈连续线形之荧光分布(酶标抗体亦显示同样之连续线形分布)。本方法又可用于与抗肾小管基底膜抗体和抗核抗体的鉴别。

2.血清中循环免疫复合物内IgG亚类的分析以3%聚乙二醇(PEG)沉淀病人血清中大分子蛋白质,分别使用鼠抗人IgG亚类IgG1、IgG2、IgG3、IgG4的单克隆抗体,以ELISA法测定免疫复合物内IgG亚类的分布状况。以同样方法亦可测定肾小球中沉积的免疫复合物内的IgG亚类。Noel 报道,不同肾炎时肾小球内沉积之IgG亚类有所不同。原发性膜性肾炎之沉积物为Igg 1和IgG4,狼疮性肾炎之沉积物为IgG1、IgG2和IgG3。

3.血清中Tamm-Horsfall糖蛋白(THP)的测定 THP是由肾小管髓袢升支厚壁段及远曲小管上皮细胞合成的糖蛋白,主要存在于正常人的尿中,血清中含有微量。当肾功能减退时,血及尿中THP明显降低,尿毒症时则血及尿中几乎测不出THP。目前可使用抗THP单克隆抗体,用ELISA夹心法测定血清中THP的含量。第一抗体使用鼠抗人THP单克隆抗体,第二抗体为HRP标记的兔抗鼠IgG。

4.其它血清中自身抗体如抗核抗体、抗双链DNA抗体、抗Sm抗体等的测定,对狼疮性肾炎有诊断意义。抗着丝点抗体的测定对进行性系统性硬化(硬皮病)有诊断意义,以上测定皆使用免疫荧光法,具体操作不再赘述。

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