中医书籍-->西医备考-->实用免疫细胞与核酸-->第五章 免疫金银及铁标记技术-->第七节 光镜免疫金银细胞化学方法-->二、免疫金银法-->(三)半薄切片的IGSS染色

(三)半薄切片的IGSS染色

大字体 | 正常字体 | 简体 | 正體
分享到:

免责声明:本文来自互联网,文章内容仅供参考!

1987年,Geoghegan等首次应用免疫金探针检测B淋巴细胞表面抗原,建立了用于光镜水平的免疫金法(Immunogold staining, IGS)。IGS的特点是染色程序简便,不要显色,就能检测细胞表面的抗原,又能检测细胞内抗原。染色时免疫金法一般要求金颗粒的直径大于20nm,并且用的浓度较高。用IGS定位细胞抗原时一般都采用间接法,下面以人肝组织HBsAg的定位为例说明IGS的步骤:

(1)石蜡切片→脱蜡至水。

(2)0.1%胰蛋白酶消化10min或3mon/L尿素消化30min。

(3)用双蒸水振洗5'×2。

(4)用0.02mol/l TBS pH8.2振洗10'×2。

(5)1%卵蛋白(EA)封闭10min。

(6)稀释鼠抗HBsAg单克隆抗体(用0.02mol/l TBS pH8.2 作1:100稀释),4℃过夜。

(7)0.02mol/l TBS pH8.2振洗10'×2。

(8)1%EA封闭10min。

(9)0.02mol/l TBS pH8.2 稀释兔抗鼠金标抗体(1:8)37℃45min。

(10)0.02mol/l TBS pH8.2振洗10'×2。

(11)双蒸水振洗5'×2。

(12)1%戊二醛,10min。

(13)双蒸水5min 。

(14)用苏木素衬染核1min,甘油封片。

结果:在光镜下可见部分肝细胞浆内有金颗粒聚集呈红色,沿细胞膜分布,表明有HBsAg定位在细胞浆内。

注意:本文来自互联网,并由中医村中医网负责收集整理!转载请注明出处!

评论: