免疫胶体金银染色和其它免疫细胞化学方法一样，要想得到好的染色效果，关键取决于标本处理是否合适，只有使抗原性及组织结构保存的好，才能使以后的染色成功成为可能，其次要用高特异性和高效价的一抗，选择合适的稀释度。由于免疫组化方法广泛应用于不同的生物学科，所要检出的抗原种类繁多，性质也各不相同。因此，不可能有一种适用于所有抗原的固定剂，而是根据不同的抗原性质区别对待。根据我们使用的固定剂介绍如下，供参考。

一、固定剂的选择及固定时间（详见表5-9）

（1）Karovsky＇s 液pH7.3。

（2）PAP液（Periodate—lysine – paraformaldehyde fixative）

配制见附录一。

表5-9 各种抗原固定剂的选择及固定时间

待检抗原 固定剂的种类 固定时间 蛋白质 　 　 酶 冰冻切片不固定，或用95%乙醇，B₅固定液 10 min 激素 冰冻切片，涂片，印片，不固定或丙酮，甲 10 min 醇，乙醇，PEG固定，B₅固定液固定 4^℃30 min 免疫球蛋白 中性福尔马林，四氯化碳（1%甲醛） 30 min 白蛋白 95%乙醇含1～5%冰醋酸 30 min 纤维蛋白元 同上 30 min 病毒 丙酮，100%乙醇，甲醇，乙醚 30 min 糖蛋白 PLP，丙酮 30 min 脂质Forssman 中性福尔马林 20 min 抗原 2.5%硫代硫酸钠，冰冻切片不固定 20 min 免疫电镜 PLP，戊二醛，戊二醛—多聚甲醛（Kacnovsky’s 液pH7.3）PEG、ECD-G等 30min

二、切片的处理与粘附。

免疫组化染色过程较长，洗的次数很多，而且均在振荡洗涤，抗原片附贴不紧，往往在最后的时刻，还没有等显色就会脱落导致前功尽弃，这个环节　虽小却会影响大局，因此，为了保证切片染色成功必须把切片处理好，解除掉片的后顾之忧（方法见第一章　）。