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磷含量测定

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1 试剂

1.1 高氯酸。

1.2 浓硫酸。

1.3 30%过氧化氢。

1.40.04mol /L 钼酸铵

取钼酸铵5g,加蒸馏水溶解成100ml。

1.5 还原剂

称取亚硫酸氢钠6g,亚硫酸钠1.2g,1-氨基-2-茶酚磺酸0.1g,加蒸馏水溶解成50ml,置棕色瓶中保存,一周内可用。

1.6 磷标准液

精确称取已干燥至恒重的磷酸二氢钾439.3mg,加蒸馏水溶解,移入100ml容量瓶中,稀释至刻度,为贮备液(1mg磷/ml)。精确量取贮备液2ml,于100ml容量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度,为磷标准液(20μg/ml)。

2 操作

2.1 样品

A群脑膜炎球菌多糖菌苗成品测磷至少取三支安瓿溶解后混合使用。

精确量取一定体积样品(含磷4~20μg)于刻度试管中,加4滴浓硫酸(约0.08ml),加热至炭化,再加2滴高氯酸(约0.06ml),消化至无色澄清,必要时可加1~2滴30%过氧化氢,但最后必须将过氧化氢除尽。消化后稍置片刻,趁热另2ml蒸馏水(如冷却后加水,需再加热),加0.4ml0.04mol /L 钼酸铵,混匀,加0.2ml还原剂,混匀,另蒸馏水至6ml,15~20分钟后,于820nm波长比色。

2.2 标准曲线

精确量取磷标准液(20μg /ml)0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml,分别置于刻度试管中,补加蒸馏水至1ml,其余操作同样品,可得一标准曲线。

3 计算

从标准曲线查出样品相当标准液之ml数A。

样品磷含量(μg /ml)=A×20/样品ml数

核酸含量测定

取含A群脑膜炎多糖抗原5±1mg /ml溶液,采用紫外分光法于260nm波长测定OD值,按E1%1cm=200计算核酸含量。

 

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